培养基是使用适于细菌生长繁殖需要的各种营养物质,人工配制而成的基质。培养基按营养成分和用途不同,分为基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培养基和厌氧培养基。按培养基物理形态分为固体、半固体和液体培养基三类。根据不同的细菌种类和培养目的,应采用不同种类的培养基。
区别:
1、MS培养基:无机盐和离子浓度较高,是较稳定的平衡溶液,其养分数量和比例较合适,可满足植物的营养和生理需要,其硝酸钾含量较高,可用于植物器官、花药、细胞和原生质体培养;
2、WPM培养基:一种低浓度培养基,适合于多种木本植物的培养。
1、配制用水
培养基的大部分是水,所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准,水的电阻应为200万欧姆,一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的
双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。
2、培养基
培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。
3、血清
培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。
4、抗菌素
为防止培养时期细菌的污染,可在培养基中添加适当抗菌素,一般用量与组织细胞培养相同:卡那霉素100单位/毫升,或双抗--青霉素100单位/毫升,链霉素100微克/毫升。
5、植物血凝素(PHA)
非增殖期的细胞不能制备染色体,如人外周血淋巴细胞,但在离体培养过程中,在PHA的作用下,可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。
经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。
PHA有粘多糖,蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂,蛋白质起凝集作用。PHA激活的细胞数随其浓度而增加,直至全部免疫活性细胞均
被激活为止,但PHA浓度过高会引起凝集,一般采用4%浓度为好。
培养基的灭菌流程如下:
1、使用前在外层锅内加入适量的水,水量与三角搁架相平;
2、将内锅放在三角搁架上,培养基分装完毕后将待灭菌的物品放在内锅里,将盖上的排气软管插到内锅的排气槽内,然后将锅四周的固定螺旋以两两对称的方式旋紧,打开排气阀;
3、加热井的同时打开排气阀,待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时,维持5分钟以上,然后将排气阀关闭;
4、当压力升至0.1兆帕,温度达到121摄氏度时,维持20到30分钟后,隔断热源;
5、出锅当压力表降至零处后,打开排气阀,旋开固定螺旋,开盖,取出灭菌物;
6、灭菌完毕取出物品后,将锅内余水倒出,保持内壁及搁架干燥,盖好锅盖即可。
肉汤培养基是常用的液体培养基,也是制备常用的细菌分离培养基及其他某些培养基的基础。
材料:牛肉、蛋白胨、氯化钠、水(蒸馏水或自来水)、比色管、蒸馏水、10%碳酸氢钠、10%醋酸、0.02%酚红指示剂、吸管等。
制作过程:
1、取新鲜瘦牛肉,除去脂肪及筋膜,切成小块后并用绞肉机绞碎,每500g碎牛肉加水1000ml,混合后置4℃冰箱过夜。
2、次日取出煮沸半小时左右,使肉渣全部凝固,加热过程中不时地用玻璃棒搅拌,以免沉底,也可以不放置冰箱过夜,直接煮沸1小时。
3、用纱布过滤,弃去肉渣(肉渣中的液体应尽量挤净),于滤液中加入1%蛋白胨及0.5%氯化钠,加热溶解,并补足失水至1000 ml 。
4、冷至50℃左右,用精密pH试纸测酸碱度,用校正pH为7.6左右;过碱时,可用10%醋酸校正之。
5、分装于试管中或三角烧瓶中,15磅(121℃)高压蒸气灭菌20~30min,备用。
关键词: 培养基 定义